人 白介素10（human IL-10）ELISA
来自Transhold
IL-10 ELISA
用途：
小鼠和人IL-10基因都定位于第1号染色体， 其基因组包括５个外显子和４个内含子，并可能有NF-κB和AP-1的结合位置。人和小鼠IL-10在DNA和氨基酸水平上分别有81％和73％的同源性。DNA序列分析表明，IL-10与EB病毒基因组中开放读框区Ⅰ(BCRF-Ⅰ)有70％左右的同源性。有人把BCRF-Ⅰ的基因产物称为病毒IL-10(vIL-10)，提示EBV可能摄取了哺乳动物IL-10的基因，以求自身的生存。IL-10的拮抗剂可能具有抗EB病毒的作用；而IL-10通过促进单核细胞表达IL-1ra而可能成为抗炎症的治疗手段，动物实验表明，IL-10可有效地避免LPS诱导小鼠休克而造成的死亡。
本试剂盒用于定量检测人血清中的IL-10的浓度。
原理：
本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。人血清中的IL-10与生物素化的抗人IL-10单抗结合，并且生物素化的抗人IL-10单抗上的生物素与酶标板上Streptavidin结合；未结合的将被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的抗人IL-10，它将与人IL-10结合而形成免疫复合物。加入TMB显色。人IL-10的浓度与OD(450nm)成正比。
试剂盒组成：
| 酶标板(Coated Wells) | 96wells | Anti- IL-10 Biotin | 12ml |
| 浓缩洗涤液(20X)(Washing Concente) | 25ml | 标准品(Standards) | 1 set |
| 显色液(TMB Substrate) | 12ml | Anti IL-10 POD | 18ml |
| 终止液(Stop Solution) | 6ml |
需要但未提供的材料
1. 可在450nm处进行读数的酶标仪；
2. 能精确吸取10-200µL的移液器；
3. 可调多道（8）移液器（50－200µL）；
4. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽；
5. 洗瓶或洗板机；
6. 蒸馏水或去离子水；
7. 1升的圆柱形量筒；
8. 血清移液器：1和（10或25 mL）；
9. 移液器枪头；
10. 纸巾；
11. 计时器，用以监控温育步骤；
12. 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；
注意事项:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入酶联物或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
标本收集
1. 用无菌静脉采血程序采集的新鲜血清和正确保存的血清可用在本试剂盒上。不需添加任何抗凝剂或进行预处理。避免使用溶血标本，脂质标本或微生物污染的血清。
2. 室温（20－25℃）下保存标本不要超过8小时。2－10℃保存血清，不超过48小时。如耽搁的时间更长，请在-20℃或更低的温度下保存标本。标本避免多次冻融，这样可能会损失抗体活性，产生错误结果。
保存： 贮藏于2-8C。
准备工作：
浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X。
操作步骤：
试剂盒应平衡至室温（20-25C ）再试验。 取出所需反应板。
1. 加入20ul标准品(Standards)、20ul血清于相应反应板孔中。
2. 每孔加入100ul Anti IL-10 Biotin。
3. 轻轻混匀30秒，封住板孔，室温(18-25C) 30分钟。
4. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。
5. 每孔加入150ul Anti IL-10 POD，轻轻混匀30秒，封住板孔，室温(18-25C) 30分钟。
6. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。
7. 每孔加入100ul显色液， 轻轻混匀10秒，室温温育20分钟。
8. 每孔加入50ul终止液（Stop Solution）。轻轻混匀30秒；30分钟内在450nm处读OD值。
以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
举例：
