兔 转化生长因子-B2（rabbit TGF-B2) ELISA

来自Transhold

                                       兔 TGF-B2

用途： 本试剂盒用于定量检测兔关节液中的TGF-B2浓度。

原理：

本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。抗兔TGF-B2单抗包被于酶标板上，兔标本中的TGF-B2会与单抗结合。加入生物素化的抗兔TGF-B2（二抗），它将与结合在单抗上的兔TGF-B2结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入TMB显色。兔TGF-B2的浓度与OD(450nm)成正比。

试剂盒组成：

酶标板(Coated Wells)	48wells	HRP	3.5ml
浓缩洗涤液(40X)(Washing Concentrate)	15ml	标准品(Standards)	6 vials
显色液(TMB Substrate)	6ml	终止液（Stop Soltuion）	6ml
Biotin－Anti Rabbit TGF-B2	1.7ml

需要但未提供的材料

1. 可在450nm处进行读数的酶标仪；

2. 能精确吸取10-200µL的移液器；

3. 可调多道（8）移液器（50－200µL）；

4. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽；

5. 洗瓶或洗板机；

6. 蒸馏水或去离子水；

7. 1升的圆柱形量筒；

8. 移液器：1和（10或25 mL）；

9. 移液器枪头；

10. 纸巾；

11. 计时器，用以监控温育步骤；

12. 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；

注意事项:

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入酶联物或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

准备工作：

1. 浓缩洗涤液(40X)用双蒸水稀释成1X（至600ml）。

操作步骤：

试剂盒应平衡至室温（20-25°C ）再试验。取出所需反应板。

1. 加入25ul标准品(Standards)、25ul标本样品于相应孔中。

2. 每孔加入25ul Biotin anti Rabbit TGF-B2，轻轻混匀30秒；室温温育 30分钟

3. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤3次。

4. 每孔加入50ul HRP，轻轻混匀30秒；室温温育 30分钟

5. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤3次。

6. 每孔加入50ul显色液， 轻轻混匀10秒，温育15分钟。

7. 每孔加入50ul终止液（Stop Solution)。轻轻混匀30秒；30分钟内在450nm处读OD值。

以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

举例：

预期值：

本试剂盒的灵敏度：75pg/ml。