准备ELISA实验的正确步骤
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当您想进行ELISA实验时，请参考本文，并请有经验的同仁进行补充。
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ELISA实验的事前准备工作一
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确定有进行ELISA实验最重要的仪器：酶标仪
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确定实验动物和ELISA检测指标
- 查找文献，根据临床意义，确定要用的实验动物（如大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、狗等）和用ELISA方法检测的实验指标（如白介素，生长因子，激素等）；
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确定要搜集的标本类型
- 确定要搜集的标本类型，如血清、抗凝血浆、肺泡灌洗液、脑脊液、尿液、关节华液、组织匀浆、细胞培养上清液等；
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确定要收集的标本数量
- 合理分组，根据实验模型，确定要收集的标本数量；
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确定购买试剂盒的厂家和试剂盒特点
- 根据标本数量，确定要购买的试剂盒的规格和数量；确认适用于要检测的标本的相应规格的ELISA试剂盒的灵敏度、检测范围、价格和到货期等情况；了解试剂盒的整盒有效期和拆开包装后的有效期(各主要成分的开瓶有效期）；
- 复孔：为了增加结果的可靠性，对标准曲线和标本，要求做双复孔或者三复孔，就是同一份标本，平行做两次或者三次。
如果本身试剂盒的稳定性好，而又不要求每个数据的绝对准确，主要目的是为了统计学意义的话，可以选择做双复孔或者是单孔。
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确定时间的合理安排
- 确定标本的采集时间；根据采集时间来安排标本的保存条件、何时进行试剂盒的购买、如何进行预实验的安排、如何进行大批量标本的检测；
- 如果标本采集时间过长，如超过六个月，请把标本放在-70度或者液氮罐中保存；在基本上收集完标本的前一个月，进行试剂定购。一般国外试剂的到货期最长一个月，有足够的时间来等待试剂盒的来到。到货后，取几个样品（最少两个，估计的低值和高值）和标准品来进行预实验。预实验成功后才能进行大批量标本的实验。请参照准备ELISA实验的正确步骤#预实验反馈的几种结果：
- 因为每个试剂盒可能都经过长途运输，所以预实验是必不可少的，这样才能保证试剂盒没有问题，而且一旦有问题可以很快速的得到解决，且不用浪费自己辛苦收集的标本。
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ELISA实验的事前准备工作二
- 样品合理采集和保存；
具体请参照
- 试剂盒购买；
确认有以下仪器和材料：
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ELISA实验需要但试剂盒中未提供的材料
- 可在试剂盒要求得波长处进行读数的酶标仪；
- 水浴箱或者是恒温箱（空气浴）；
- 能精确吸取10-200µL的移液器；
- 可调多道（8）移液器（50－200µL）；
- 供可调多道移液器使用的试剂存放槽；
- 洗瓶或洗板机；
- 蒸馏水或去离子水；
- 1升的圆柱形量筒；
- 移液器：1和（10或25 mL）；
- 移液器枪头；
- 纸巾；
- 计时器，用以监控温育步骤；
- 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；
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其中需要注意的是：
- 在实验进行前，需要确认酶标仪在恰当波长能够正常读数，且能正常打印；
- 用一支温度计来测量使用的温育设备（水浴箱或者是恒温箱），温控是否精确；因为随着仪器得老化，上面得控温不一定准确，所以需要实际测量一下温度。
- 对移液器，也就是加样器进行校正；确认加样准确。
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ELISA实验的进行（预实验）
仔细读试剂盒的说明书和注意事项；
参照ELISA和影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法，详细明确各个实验步骤。
这一阶段对加样要求不高，主要是用于熟悉整个操作，验证试剂盒，明确标本是否可以检测出来。
相信做过一次以后，即时从来没有做过ELISA实验的人，也会信心大增的。
根据预实验反馈的几种结果来确定是进入下一步：大批量实验，还是重新进行预实验。只有预实验结果是好得，成功的时候，才能进入下一步。
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预实验反馈的几种结果：
- 预实验结果：定量检测中，如果标准曲线正常，标本值落在最高点和最低点之间，认为预实验结果是好得，成功的。
- 不好的预实验结果：
- 定量检测中，标准品如果不显色，请参照来查看自己得操作是否有问题；请与厂家联系解决办法，是再做一次，还是返回厂家由厂家来解决；
- 定量检测中，标准品正常显色，但标本没有显色；这时有两种情况：
- 有的时候，各种标本中某些指标含量很低时，也会出现这种情况；可以通过修改某些操作步骤来达到提高灵敏度得问题；或者通过超滤的方法来浓缩标本，也可以使标本能检测出；也可以通过更换更灵敏的试剂盒来达到这个目的。
- 有的时候，动物品系问题导致，要检测得指标与试剂盒中包被得抗体不同，可能数据测不出。
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ELISA实验的进行（大批量标本的实验）
与预实验不同的是，增加了对加样的要求，要求加样迅速、准确。
