大鼠 胰岛素样生长因子－1（Rat IGF-1）ELISA
来自Transhold
大鼠IGF-1 ELISA
用途：
本试剂盒用于定量检测大鼠血清或血浆中的IGF-1的浓度。
原理：
本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。抗大鼠IGF-1单抗包被于酶标板上，大鼠标本中的IGF-1会与单抗结合。加入生物素化的抗大鼠IGF-1（二抗），它将与结合在单抗上的大鼠IGF-1结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入TMB显色。大鼠IGF-1的浓度与OD(450nm)成正比。
试剂盒组成：
| 酶标板(Coated Wells) | 96wells | Anti-rat IGF-1 Biotin | 12ml |
| 浓缩洗涤液(50X)(Washing Concentrate) | 15ml | 标准品(Standards) | 1set |
| 显色液(TMB Substrate) | 12ml | 浓缩酶联物（HRP） | 60× |
| 终止液(Stop Solution) | 10ml | 酶联物稀释液(HRP Diluent) | 15ml |
| 样品稀释液(Sample Diluent) | 100ml |
标准品已经稀释50000倍。
需要但未提供的材料
1. 可在450nm处进行读数的酶标仪；
2. 能精确吸取10-200µL的移液器；
3. 可调多道（8）移液器（50－200µL）；
4. 供可调多道移液器使用的试剂存放槽；
5. 洗瓶或洗板机；
6. 蒸馏水或去离子水；
7. 1升的圆柱形量筒；
8. 血清移液器：1和（10或25 mL）；
9. 移液器枪头；
10. 纸巾；
11. 计时器，用以监控温育步骤；
12. 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水）；
注意事项:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
保存：
贮藏于2-8C。
样品：
在此检测中，可使用血清、血浆样品。
准备工作：
1. 浓缩洗涤液(50X)用双蒸水稀释成1X（至750ml）。
2. 配制1x HRP： HRP用酶联物稀释液稀释60倍，即1份浓缩HRP加入59份HRP稀释液。即50ul HRP加入2950ul HRP稀释液。
3. 样品应稀释50000倍，即10ul血清/血浆加入5ml生理盐水中，混匀（1：500）；然后将混匀液10ul加入1000ul样品稀释液中（1：100），混匀；这样总共稀释50000倍。标准品已经稀释，不用再稀释。
操作步骤：
试剂盒应平衡至室温（20-25C ）再试验。 取出所需反应板。
1. 加入100ul标准品(Standards)、100ul已稀释标本于相应反应板孔中。
2. 轻轻混匀30秒，20-25C温育 20分钟。
3. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤3次。
4. 每孔加入100ul Biotin anti-rat IGF-1。轻轻混匀30秒，20-25 C温育 20分钟
5. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤3次。
6. 每孔加入100ul 1x HRP。轻轻混匀30秒，封住板孔，20-25 C温育 10分钟
7. 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤3次。
8. 每孔加入100ul TMB显色液， 轻轻混匀10秒，20-25 C温育 20分钟。
9. 每孔加入100ul终止液（Stop Solution)。轻轻混匀30秒；15分钟内在450nm处读OD值。
以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
Rat IGF-1(pg/ml)＝标准曲线上查出的浓度
